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耐药肺结核病诊断利器-分子检查
来源: 作者: 编辑: 2011/6/30 12:22:33 浏览:3284
    2007年春天一名美国游客携新婚夫人在游历欧洲的法国、希腊、意大利、北美洲的加拿大期间,两次无视美国疾病预防控制中心(CDC)的警告,迫使美国政府发出了自1963年以来的首次隔离令,强制其进行隔离治疗。这名通缉犯是一位携带有超级耐药结核菌的病人称为超级耐药肺结核病人(Extensively drug-resistant tuberculosis, XDR-TB),为防止该病人携带的超级耐药结核菌的传播,世界卫生组织(WHO)和美国政府向该病人的所有密切接触者发出警告,建议接触者结核病进行耐药结核病的筛查。
    结核病是一种古老的传染病,是由结核菌引起,埃及的木乃伊中就曾检出该菌。结核病这种古老的疾病自上世纪九十年代起又重新肆虐,由于结核菌的传染,全球有三分之一的人感染结核菌,约有1400万例肺结核病人。而1992年“耐多药结核病”(MDR-TB)出现,即结核病人感染的结核菌至少同时对一线抗结核药物中的异烟肼和利福平耐药;15年后又出现了“超级/严重耐多药结核病”(XDR-TB) ,该病人除对异烟肼、利福平耐药,还同时对任何喹诺酮类药物以及三种二线注射药物(硫酸卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星)中至少一种具耐药性的结核病,MDR-TB/XDR-TB属于广泛耐药,治疗不易,一旦感染MDR-TB治愈的可能性为%,XDR-TB为30%。耐药肺结核病难治疗,难治愈,需要尽早发现和治疗。传统确诊耐药肺结核病人需要8-10周的时间,而快速的分子检查可以在1-2天的时间确定耐药肺结核病,分子检测是诊断耐药肺结核病的利器。
    传统的耐药结核病检测,首先要从可疑结核病人的痰中分离出结核菌,分离结核菌使用特殊的培养基,常用的培养基含有鸡蛋液和甘油,结核菌吃着这种高营养的食品才能繁殖,结核菌繁殖很慢,一个结核菌24小时才能变成2个,48小时变成4个,而1个普通细菌20分钟就能变成2个,结核菌比普通细菌慢了70多倍。1个结核菌需要4周的时间长成被人看到的菌落,才能被用来做药敏试验,检测是否耐药。传统结核菌的药敏试验也是在培养基上进行,在含一定药物的固体培养基上接种105-106对数生长期的结核菌,当结核菌能在抑制结核菌生长的最低药物浓度(MIC)下生长时被界定为耐药菌株,反之则为敏感菌株。耐药的结核菌也需要4周时间才能完成。
分子检查则是检测结核菌的突变基因。结核杆菌耐药主要是基因位点突变引起耐药,不同的基因位点的突变联系对不同的药物的耐受,inhA , rpoB , rpsL/ rrs , embB 和gyrA基因位点突变联系着异烟肼、利福平、链霉素,乙胺丁醇和喹诺酮耐药。分子检查为检测结核菌基因组DNA,首先提取痰里结核菌的DNA,然后再检测DNA是否有耐药突变。检测DNA的方法不同主要有基于基因测序的分析方法、线性探针杂交法及分子信标荧光定PCR方法。基因测序的分析方法就是检测结核菌的基因序列,将检出的基因序列与标准基因序列比较,在基因序列在某个药物耐药区发生突变的为耐某种药物的结核病。分子信标荧光定PCR方法方法使用荧光定量PCR仪的熔解曲线功能,PCR扩增特异的耐药区的DNA片断,经熔解曲线法检测该片断是否发生耐药突变,判定耐药结核病。线性探针杂交法法也是PCR扩增特异耐药区的DNA片断,在用分子杂交方法检测该片断是否有变化,判定耐药结核病。因为分子检测检测的是结核菌的DNA,不需要对结核菌进行传代繁殖,最快的检测可以在2-3个小时判断出是否为耐药肺结核病,这使的耐药肺结核病的诊断时间可缩短近一千倍。这对耐药肺结核病的早发现、早治疗,防止耐药肺结核病的传播,降低耐药结核病的发病是非常有意义的。
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